Lykilmunur - SYBR Green vs Taqman

SYBR Green og Taqman eru tvær aðferðir sem notaðar eru til að greina eða horfa á magnunarferli rauntíma PCR. SYBR Green er aðferð sem byggist á innbyrðis litunar litarefnis litarefna meðan Taqman er aðferð byggð á vatnsrofsrannsókn. Bæði tæknin eru hönnuð til að búa til flúrljómun meðan á PCR stendur, sem gerir PCR vél í rauntíma kleift að fylgjast með viðbrögðum á „rauntíma“. SYBR græn aðferð er framkvæmd með því að nota flúrperu sem kallast SYBR grænn og skynjar mögnunina með því að binda litarefnið við framleitt tvöfaldan streng. Taqman er framkvæmt með tvöföldum merktum rannsaka og greinir mögnunina með niðurbroti rannsakandans með Taq fjölliðu og losar flúorófórinn. Þetta er lykilmunurinn á SYBR Green og Taqman.

INNIHALD 1. Yfirlit og lykilmunur 2. Hvað er SYBR grænt 3. Hvað er Taqman 4. Samanburður við hlið - SYBR grænn vs Taqman 5. Yfirlit

Hvað er SYBR grænt?

SYBR Grænn er blómstrandi litur sem notaður er til að lita kjarnsýrur, sérstaklega tvöfaldur þráður DNA í sameindalíffræði. SYBR græn aðferð er notuð til að magngreina PCR vörur á rauntíma PCR. Þegar það hefur bindst við DNA, dregur DNA-litarefnið sem myndast frá sér blátt ljós og gefur frá sér grænt ljós. Það gerist vegna skipulagsbreytingarinnar sem eiga sér stað í litarefnasameindinni við bindingu við tvístrengju DNA. Þegar PCR býr til meira og meira DNA bindast fleiri litarefnasameindir við DNA, sem býr til meiri flúrljómun. Þess vegna eykst flúrljómun með uppsöfnun PCR vörunnar. Þess vegna er hægt að mæla magn PCR vöru með magntölu með SYBR Green flúrljómunargreiningunni.

Einnig er hægt að nota SYBR grænt litarefni til DNA merkinga í frumumyndun og flúrljómandi smásjá. Í stað þess að skipta um etidíumbrómíði með SYBR Green þar sem etídíumbrómíð er krabbameinsvaldandi litarefni með förgunarvandamál við DNA-sjón í gler rafskautinu.

Það eru kostir og gallar SYBR grænu aðferðina. Þessi aðferð er mjög viðkvæm, ódýr og auðveld í notkun. Hins vegar, vegna getu þess til að binda við hvaða tvístrengja DNA sem er, getur ósértæk binding leitt til ofmetningar á PCR vöru.

Hvað er Taqman?

Taqman er önnur aðferð við SYBR Green til að fylgjast með rauntíma PCR ferli. Þessi aðferð er háð 5 '- 3' exonuclease virkni Taq fjölliðuensíms til að brjóta niður rannsaka meðan á lengingu nýs þráðar stendur og losa flúorófor. Tvöfaldir merktir rannsakar eru notaðir við þessa aðferð og hún byggist á vatnsrofi rannsaka. Rannsóknir eru flúrljómandi merktar DNA fákirni með flúrljómandi sameind (flúorfór) í 5'-endanum og slökunarsameind í 3'-endanum. Þau eru hönnuð til að bindast einu strandaða sniðmátið á gagnstæða hlið grunngræðslunnar. Taq fjölliðu bætir núkleótíðum við grunninn og teygir nýja strenginn í átt að tvöföldum merktum rannsökum. Þegar Taq fjölliðan hittir rannsakann, virkjar exonuclease verkun Taq fjölliðunnar og brýtur niður rannsóknina. Þegar það er búið til nýmyndun nýs þráðarins er rannsakandi beittur fyrir fullkomnu niðurbroti og losar flúorófórinn. Losun fluorophore býr til flúrljómun. Flúrperur Quencher sameindir svala skilvirku ljósi á skilvirkan hátt og skapa afköst til magngreiningar á PCR vörunni. Losun flúorfora og magn PCR afurða er í réttu hlutfalli við það. Þess vegna er auðvelt að gera magn með Taqman aðferðinni.

Taqman aðferð er notuð í rauntíma PCR, magngreining tjáningar, greining erfðafræðilegra fjölbreytileika, magngreining á DNA litningi, bakteríugreining, sannprófun á greiningu á örum, SNP arfgerð.

Hver er munurinn á SYBR grænu og Taqman?

Yfirlit - SYBR Green og Taqman

Taqman og SYBR græn eru tvær aðferðir sem notaðar eru við rauntíma PCR (magn PCR). Báðar aðferðirnar gera kleift að mæla PCR vöruna á skilvirkan hátt og treysta á losun flúrljómunarinnar. Taqman aðferðin notar tvöfalda merka rannsaka til að greina uppsafnaðan DNA meðan SYBR Green aðferð notar flúrperu litarefni. Báðar þessar aðferðir hafa einnig mismunandi notkun í sameindalíffræði.

Tilvísun: 1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour og Shaghayegh Haghjooy Javanmard. „Samanburður á SYBR grænu og TaqMan aðferðum í megindlegum rauntíma fjölliðu keðjuverkunargreiningum á fjórum undirtegundum adenósínviðtaka.“ Háþróaðar lífeindafræðilegar rannsóknir. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Vefur. 13. mars 2017. 2. „Rauntíma grunnreglur PCR.“ Rauntíma PCR, megindleg (qPCR), Primers & Mastermix: Primerdesign Ltd. Np, nd Web. 13. mars 2017. 3. “SYBR græn og önnur rauntíma PCR litarefni.” Biocompare. Np, 5. apríl 2010. Vefur. 14. mars 2017

Mynd kurteisi: 1. „PCR með SYBR grænu“ Eftir –Ygonaar 23:09, 7 mars 2006 (UTC) - Þetta er myndrit sem Ygonaar hefur búið til með Power point, CC BY-SA 3.0, https://commons.wikimedia.org /w/index.php?curid=619528 2. “Taqman” eftir notanda: Braindamaged - Eigin verk (Public Domain) í gegnum Commons Wikimedia